1、荧光定量PCR之后计算目的基因的相对表达量一般采用2-△△ct的方法。我们还是假设对照组和处理组各有三个生物学重复(即对照组3个cDNA样品cDNA1, cDNA2, cDNA3,处理组3个cDNA样品cDNA4, cDNA5, cDNA6),三个技术重复(即每个cDNA的每个基因点三个孔)。
2、相对定量可以分为比较Ct法和其他一些相对方法。比较Ct指的是通过与内参基因Ct值之间的相差来计算基因表达差异,也称之是2-DDCt。1绝对定量从标准曲线获得线性方程:Y=-432X+3638;R2=0.995,E=95%,所以可以进行数据分析。
3、计算每个样品的ΔCt值,即目的基因Ct值减去内参基因Ct值。 计算ΔCt平均值作为参考。可以选择任意一组(如空白对照组)计算平均ΔCt值。 计算ΔΔCt值,即将每个样品的ΔCt值与参考组的平均ΔCt值相减。 计算2^-(Ct)值,代表目标基因相对于内参基因的相对表达量。